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Bedienungsanleitung - PEQLAB Biotechnologie GmbH

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Bedienungsanleitung / Manual
C-Chip™
System Neubauer Improved
Einmal-Zählkammer / Disposable Haemocytometer
0314_D+E
Creating the future together.
INHALT
Allgemeine Informationen...................................................................................................... 2
1. Lieferumfang............................................................................................................... 2
2. Eigenschaften.............................................................................................................. 2
3. Sicherheitshinweise...................................................................................................... 2
Einleitung ............................................................................................................................. 3
Zählen mit dem C-Chip™ ....................................................................................................... 4
A. Allgemeine Methode ................................................................................................... 4
B. Säugerzellen .............................................................................................................. 4
C. Erythrozyten (Verdünnung 1 : 200) .............................................................................. 4
D. Leukozyten (Verdünnung 1 : 20) .................................................................................. 4
Troubleshooting .................................................................................................................... 5
Technischer Service und Bestellinformationen .......................................................................... 5
For an english version of this manual see page 7.
Bedienungsanleitung C-Chip™
ALLGEMEINE INFORMATIONEN
1. Lieferumfang
Folgende Komponenten sind im Lieferumfang des C-Chip™ enthalten:
 Einmal-Zählkammer
 Bedienungsanleitung
2. Eigenschaften
 Hochpräzise Einmal-Zählkammer, die mit geringsten Fertigungstoleranzen aus hochwertigem
Kunststoff hergestellt wird.
 Keine Verwendung von Deckgläschen nötig.
 Durch fest vorgegebene Tiefe der Kammern höchste Präzision und Reproduzierbarkeit bei
Auszählungen.
 Reduziert das Infektionsrisiko durch minimierte Exposition zu biologisch aktiven, infektiösen
Materialien.
 Durch einmalige Benutzung keine Notwendigkeit zur Reinigung des Chip sowie Unterbrechung
der Arbeitsabläufe. Dadurch erhöhte Produktivität.
 Leichter und sicherer im Vergleich zu Zählkammern aus Glas.
3. Sicherheitshinweise
Bei der Handhabung von gefährlichem oder infektiösem Material bitte beachten:
 geeignete Vorsichtsmaßnahmen treffen
 vorsichtig mit dem Material umgehen
 in geeigneten Behältern entsorgen
Anmerkung: Eine verlängerte Einwirkzeit von organischen Lösungsmitteln führt zur Beschädigung
des C-Chip™-Materials. Xylen- und Toluol-haltige Medien sollten daher vermieden und bevorzugt
Glycerin-, Gelatine- oder andere Wasser-basierte Medien verwendet werden. Der C-Chip™ ist für
den einmaligen Gebrauch konzipiert. Eine Mehrfachbenutzung ist nicht vorgesehen. C-Chip™
direkt nach Öffnen der Verpackung verwenden.
PEQLAB_V0314_D
2
Bedienungsanleitung C-Chip™
EINLEITUNG
Der C-Chip™ (DHC-N01) ist eine Einmal-Zählkammer aus Kunststoff zur manuellen Bestimmung
der Zellzahl. Er enthält zwei getrennte Zählkammern (Fig.2) mit separaten Injektionsöffnungen
zum Einpipettieren der auszuzählenden Zellsuspension (sample injection area) und mit je einem in
der Oberfläche eingravierten Zählraster (detection area, Fig.1).
Das Zählraster des C-Chip™ (DHC-N01) entspricht exakt dem Raster der Neubauer 'improved'
Zählkammer. Es besteht aus 9 Quadraten (je 1 x 1 mm groß) mit einer definierten Tiefe von
0.1 mm. Jedes Quadrat hat ein Volumen von 0.1 mm3 bzw. 10–4 cm3 (Fig.1).
Das zentrale Quadrat ist in 25 kleine Quadrate mit dreifacher Liniengebung aufgeteilt. Die 4 EckQuadrate sind in jeweils 16 kleine Quadrate unterteilt.
Fig.1 Grid pattern
Detection area
Sample injection area
Fig.2 DHC-N01
PEQLAB_V0314_D
3
Bedienungsanleitung C-Chip™
ZÄHLEN MIT DEM C-CHIP™
A. Allgemeine Methode
 Probe gut mischen.
 10 μl der Probe in die Injektionsöffnung (siehe Fig.2) pipettieren, so dass die Probe durch
Kapillarkräfte in die Zählkammer gesogen wird.
 Zellen unter dem Lichtmikroskop auszählen.
Zellen pro ml = Durchschnittswert pro Quadrat x Verdünnungsfaktor x Volumenfaktor
B. Säugerzellen
 Adhärente Zellen mit Trypsin-EDTA lösen und pelletieren, Suspensionszellen pelletieren.
 Überstand vorsichtig abpipettieren, ohne das Pellet zu zerstören.
 Zellen in einem entsprechenden Volumen Wachstumsmedium oder PBS auf eine
ungefähre Dichte von 5 x 103 bis zu 5 x 106 einstellen. Hier liegt der optimale Bereich
für verlässliche Zellzählungen.
 Zellen durch Pipettieren sorgfältig resuspendieren, bis keine Klumpen oder Zellverbände
mehr sichtbar sind.
 10 μl der Probe in die Injektionsöffnung (siehe Fig.2) pipettieren.
 Zellen in 5 großen Quadraten unter dem Lichtmikroskop auszählen.
Zellen pro ml = (Zellzahl in 5 Quadraten/5) x Verdünnungsfaktor x 104 (Volumenfaktor)
C. Erythrozyten (Verdünnung 1 : 200)
 Blut mit laborüblichen Methoden verdünnen.
 10 μl der Probe in die Injektionsöffnung (siehe Fig.2) pipettieren.
 Zellen in 5 kleinen Quadraten des zentralen Quadrats unter dem Lichtmikroskop
auszählen (4 kleine Eck-Quadrate und ein kleines Mittel-Quadrat).
Erythrozyten pro ml =
Zellzahl in 5 kleinen Quadraten x 5 x 200 (Verdünnungsfaktor) x 104 (Volumenfaktor)
D. Leukozyten (Verdünnung 1 : 20)
 Blut mit laborüblichen Methoden verdünnen.
 10 μl der Probe in die Injektionsöffnung (siehe Fig.2) pipettieren.
 Zellen in den 4 großen Eck-Quadraten unter dem Lichtmikroskop auszählen.
Leukozyten pro ml =
(Zellzahl in 4 großen Quadraten/4) x 20 (Verdünnungsfaktor) x 104 (Volumenfaktor)
PEQLAB_V0314_D
4
Bedienungsanleitung C-Chip™
TROUBLESHOOTING
Bei schlechter Auszählbarkeit mit Hilfe des C-Chip™:




Probe vorsichtig in die Zählkammer pipettieren.
Luftblasen unbedingt vermeiden.
Vor dem Auszählen eventuell vorhandene Staubpartikel vom C-Chip™ entfernen.
Einstellung und Fokussierung des Mikroskops korrigieren.
TECHNISCHER SERVICE UND BESTELLINFORMATIONEN
Bei Fragen rund um den C-Chip™ wenden Sie sich bitte an Ihren PEQLAB-Außendienstmitarbeiter
oder den Technischen Service unter Tel. 09131 610 7020 oder per Email unter
service@peqlab.de. Kostenlose Muster des C-Chip™ stehen auf Nachfrage zur Verfügung.
Artikel
C-Chip™
Neubauer Improved
Einmal-Zählkammer
C-Chip™
Neubauer Improved
Einmal-Zählkammer
PEQLAB_V0314_D
Beschreibung
50 C-Chips für 100 Tests,
einzeln steril verpackt,
inkl. Anleitung
5 x 50 C-Chips für 500 Tests,
einzeln steril verpackt,
inkl. Anleitung
5
Bestell-Nr.
84-DHCN-01
84-DHCN-02
Manual C-Chip™
PEQLAB_V0314_E
6
Manual C-Chip™
CONTENT
General Information.............................................................................................................. 8
1. Unpacking .................................................................................................................. 8
2. Features...................................................................................................................... 8
3. Safety Precautions ....................................................................................................... 8
Introduction .......................................................................................................................... 9
Counting with C-Chip.......................................................................................................... 10
A. General Methods ...................................................................................................... 10
B. Mammalian cell counting ........................................................................................... 10
C. Erythrocyte counting (1:200 dilution) .......................................................................... 10
D. Leukocyte counting (1:20 dilution) .............................................................................. 10
Trouble shooting ................................................................................................................. 11
Technical Service and Order information .............................................................................. 11
PEQLAB_V0314_E
7
Manual C-Chip™
GENERAL INFORMATION
1. Unpacking
When you receive the C-Chip (DHC-N01) for the first time, you will find the following components
in your package:

Disposable haemocytometer

Instruction manual
2. Features

Precise fixed depth-counting chamber with superior accuracy and reproducibility.

No need to place cover glass on slide.

Reduces the risk of exposure to potentially infectious material.

Increases productivity by eliminating cleaning and work interruptions.

Light and unbreakable in comparison to glass.
3. Safety Precautions
For analyzing hazardous or potential infectious materials:

Take necessary precautions

Handle with care

Dispose in an appropriate way
NOTE: Long exposure to solvents will cause the slide to warp. Xylene and toluene based mounting
media should be avoided. Glycerol, gelatine and other aqueous-based media are recommended.
The C-Chip is intended for single use only. Do not reuse. It should be used immediately after
unsealing.
PEQLAB_V0314_E
8
Manual C-Chip™
INTRODUCTION
The C-Chip (DHC-N01) is a disposable plastic haemocytometer used for manual cell counting. It
consists of surface-patterned two enclosed chambers with two ports for sample injection (Fig. 2).
The DHC-N01 grid pattern is exactly same as the Neubauer Improved. It consists of 9 large
squares, each measuring 1ⅹ1 mm, and the depth of the chamber is 0.1 mm. Each square has a
total volume of 0.1 mm3 or 10-4 cm3 (Fig. 1).
The central square is divided into 25 small squares with triple lines and four corner squares are
divided into 16 small squares.
Fig.1 Grid pattern
Detection area
Sample injection area
Fig.2 DHC-N01
PEQLAB_V0314_E
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Manual C-Chip™
COUNTING WITH C-CHIP
A. General Methods



Mix the samples well.
Load 10 μl of sample into the sample injection area in Fig. 2, so that it fills the chamber
by capillary action.
Count the cells under the microscope.
Cells per ml = Average count per square x dilution factor x volume factor
B. Mammalian cell counting







Treat the cell samples with trypsin-EDTA.
Carefully remove the supernatant with a pipette tip without disturbing the pellet.
Add an appropriate volume of growth media or PBS to dilute to a final concentration of
5 x103 cells/ml to 5 x106 cells/ml.
Thoroughly resuspend the cell pellet with a pipette.
Check visually if there are any cell clumps or agglomerates.
Load 10 μl of sample into the sample injection area in Fig. 2.
Count the cells in 5 large squares.
Cells per ml = (cells in 5 large squares/5) x dilution factor x 104 (volume factor)
C. Erythrocyte counting (1:200 dilution)



Dilute blood using accepted laboratory methods.
Load 10 μl of diluted sample into the sample injection area in Fig. 2.
Count the erythrocytes in the 5 small squares (four small corner squares and one small
middle square) of the large center square.
RBCs per ml = cells in 5 small squares x 5 x 200 (dilution factor) x 104 (volume factor)
D. Leukocyte counting (1:20 dilution)



Dilute blood using accepted laboratory methods.
Load 10 μl of diluted sample into the sample injection area in Fig. 2.
Count the leukocytes in the 4 large corner squares.
WBCs per ml = (cells in 4 corner squares/4) x 20 (dilution factor) x 104 (volume factor)
PEQLAB_V0314_E
10
Manual C-Chip™
TROUBLE SHOOTING
In case of poor visibility results:

Carefully load samples into the C-Chip in order to prevent the introduction of air bubbles.

Observe after removing the dust from samples.

Adjust the focus of the microscope.
TECHNICAL SERVICE AND ORDER INFORMATION
If you have any questions concerning C-Chip™ or other PEQLAB products, please do not hesitate
to contact us. You can find the appropriate contact person at www.peqlab.com. Free samples of
the C-Chip™ are available on request.
Product
C-Chip™
Neubauer Improved
Disposable Haemocytometer
Description
50 C-Chips for 100 tests,
single sterile packaging,
incl. manual
Order No
84-DHCN-01
C-Chip™
Neubauer Improved
Disposable Haemocytometer
5 x 50 C-Chips for 500 tests,
single sterile packaging,
incl. manual
84-DHCN-02
PEQLAB_V0314_E
11
Manual C-Chip™
NOTES
PEQLAB_V0314_E
12
Manual C-Chip™
NOTES
PEQLAB_V0314_E
13
D
AT
UK
USA
PEQLAB Biotechnologie GmbH, 91052 Erlangen, Freecall (D): 0800 100 20 16, info@peqlab.de, www.peqlab.de
PEQLAB Biotechnologie GmbH, 6404 Polling, Tel: +43 (0) 5238 84 169, info@peqlab.at, www.peqlab.at
PEQLAB Ltd., Southampton SO31 7ZN, Freephone (UK): 0808 202 1302, info@peqlab.co.uk, www.peqlab.co.uk
PEQLAB LLC, Wilmington, DE 19810, Toll-Free (US): 877 737 5220, info@peqlab.us, www.peqlab.us
Creating the future together.
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